세포 독성 평가

정의

세포독성 평가는 특정 물질이 세포에 어떤 영향을 미치는지, 즉 세포의 상태를 유지시키는지 혹은 손상시키는지를 확인하는 기초 안전성 평가이다. 이 과정에서 사용되는 WST-8, MTT 등의 시약을 사용하여, 이 시약들은 살아 있는 세포가 가진 미토콘드리아 효소 활성을 이용해 세포 생존 정도를 정량적으로 측정하는 방식으로 진행된다. 이 시약은 살아 있는 세포의 효소와 반응해 수용성 포마잔 색소로 변환되며, 생성된 색의 농도는 세포가 얼마나 생존하고 있는지를 그대로 반영한다.

원리

세포내의 Dehydrogenase의 활성에 의해 발생되는 전자를 Electron mediator가 세포막을 자유롭게 이동하면서 배양액 내의 WST-8을 환원시켜 오렌지색의 Formazan을 생성합니다. 물에 녹지 않아 유기용매 (DMSO)가 필요한 MTT assay와는 다르게 물에 잘 녹는 WST-8을 사용함으로써 사용이 편리해지고 세포에 영향을 주는 반응 변수들을 제거한 제품이고 또한 안정적이며 보다 높은 민감성을 갖는 제품입니다.

실험 방법

1. Cell seeding 

세포를 96well plate에 1×10⁴ cells/well로 접종 후 24시간 안정화 시킵니다. 

2. 후보 물질 처리 (선택사항)

세포 독성을 평가하고자 하는 후보물질 (drug, 천연물, 화장품, 의료기기 등)을 24시간, 48 시간, 72 시간드 아댱한 시간대로 처리 합니다. 

3. WST-8 시약 반응

각 well에 WST-8 시약을 첨가하고 2시간 동안 37도 배양기에서 반응 시킵니다. 

4. 흡광도 측정

Microplate reader기 450 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율 계산

실험 예상 결과 

적용 분야