1) SDS-PAGE에 의한 단백질 분리

• SDS로 단백질에 음전하를 부여하여 분자량 크기에 따라 이동하도록 함
• 젤 상단: 고분자량 단백질, 젤 하단: 저분자량 단백질
• 타깃 분자량에 따라 8–15% 겔 농도 선택

2) 전이(Transfer)와 Blocking

• PVDF 또는 Nitrocellulose 멤브레인으로 단백질 전이
• 멤브레인 전체에 단백질이 고정되어 항체 반응의 기판이 됨
• 5% BSA 또는 Skim milk로 비특이적 결합을 차단(Block)

3) 항체 반응과 검출

• 1차 항체: 타깃 단백질에 특이적으로 결합
• 2차 항체: HRP 또는 형광 표지로 신호 증폭
• 검출: Chemiluminescence(ECL) 또는 Fluorescence 기반
• CCD 카메라 또는 이미지 분석 시스템으로 밴드 촬영

4) 정량 분석과 Normalization

• ImageJ 등 소프트웨어로 band intensity 측정
• β-Actin, GAPDH, Tubulin 등 로딩 컨트롤 대비 정규화
• 컨트롤군 대비 상대 발현량(% 또는 Fold change) 계산
• 통계분석(t-test, ANOVA)과 그래프 작성

5) 연구 적용 예

• 신호전달 경로(MAPK, PI3K/AKT, NF-κB 등) 분석
• 섬유화(α-SMA, Collagen I), 산화스트레스(HO-1, Nrf2) 분석
• 항암·항염·대사·운동 효능의 분자 기전 검증
• 논문·특허·연구보고서의 핵심 데이터로 활용

UMUST R&D는 전통 복합 처방 Saengmaeksan(SMS)의 운동 중 에너지 대사 개선 효과를 다룬 PLOS ONE 논문(2024)을 비롯해, 여러 연구에서 웨스턴블롯을 활용해 MAPK 및 항산화 기전을 규명해 왔습니다.

1) In vitro Western Blot 서비스

• 세포주(예: A549, RAW264.7, L6 등) 및 고객 제공 세포
• 후보물질 농도·시간 의존성 분석
• 단백질 추출, 정량, SDS-PAGE, Transfer, 항체 반응
• MAPK, PI3K/AKT, NF-κB, fibrosis, oxidative stress 등 다양한 타깃

2) In vivo 조직 Western Blot

• 간, 폐, 신장, 심장, 뇌, 근육 등 주요 장기 분석
• 질환모델(섬유화, 대사질환, 암, NASH 등)과 연계
• 조직병리(H&E, IHC)와 WB 데이터를 통합한 해석
• 후보물질의 전신효과 및 타깃 장기별 기전 확인

3) Phospho-Protein 특화 서비스

• p-ERK, p-p38, p-JNK, p-AKT, p-NF-κB 등 인산화 단백질 분석
• Time-course · Dose-response 기전 연구에 최적화
• Total form과의 비율(Fraction) 분석 제공
• SMS 논문과 유사한 포맷으로 기전 Diagram 및 Figure 제작 가능

4) 논문 Figure & 그래프 제작

• Western blot 밴드 이미지 최적화(밝기/대비 조정 기준 준수)
• Fold change bar graph, line graph 등 시각화
• p-value, 유의성 표시(*, **, ***) 포함
• Figure legend(논문용 설명문) 초안까지 제공

5) 타깃 마커 예시

• 신호전달: ERK, p38, JNK, AKT, mTOR 등
• 섬유화: α-SMA, Collagen I/III, TGF-β1
• 산화스트레스: HO-1, Nrf2, SOD, Catalase
• 세포사/증식: Cleaved Caspase-3, BAX/BCL-2, Cyclin, Ki-67
• 대사: PPAR-γ, C/EBPα, SREBP-1c 등

※ 원하는 타깃 리스트를 주시면 항체 선정부터 함께 설계합니다.