HPLC
HPLC는 혼합물 내 각 성분을 분리·식별·정량화하는 분석 화학의 핵심 장비로, 의약품 품질 관리와 규제 대응의 필수 도구입니다. 고압 펌프로 이동상을 컬럼에 통과시키며 화합물을 소수성 차이에 따라 분리합니다.
천연물 유효 성분 정량, 합성 의약품 순도 확인, 대사체 분석 등 비임상 연구 전반에서 데이터 신뢰성을 담보합니다. FDA 등 규제 기관 가이드라인에 부합하는 밸리데이션 데이터 확보까지 지원합니다.
후보물질의 순도·함량 검증 및 품질 관리 데이터가 필요하신가요?
연구 목적에 맞는 실험 조합, 단계별 견적, 샘플 조건을 함께 설계해 드립니다.
컬럼: 분리의 핵심
컬럼은 크로마토그래피 분리가 실제로 일어나는 장소입니다.
분석 대상 물질의 극성, 분자량, 이온 특성에 따라 고정상(Stationary Phase)을 선택합니다.
비극성 고정상 + 극성 이동상
C18, C8 등 알킬 체인이 결합된 실리카를 사용합니다. 극성이 낮을수록 고정상에 오래 머물러 늦게 용출됩니다. 전체 HPLC 분석의 70~80%가 역상 방식입니다.
극성 고정상 + 비극성 이동상
실리카(SiO₂) 자체나 NH₂, Diol 표면을 사용합니다. 극성이 높을수록 늦게 용출됩니다. 지용성 비타민, 이성질체 분리에 활용합니다.
정전기적 상호작용으로 분리
하전된 고정상이 반대 전하 분석물을 포착합니다. 아미노산, 무기 이온, 단백질, 핵산 분리에 사용합니다.
분자 크기(유체역학 부피)로 분리
큰 분자가 먼저 용출됩니다. 단백질, 고분자, 올리고뉴클레오타이드의 분자량 분포 분석에 활용합니다.
분석 절차
1 용매 저장조이동상 보관 | 2 탈기 장치기포 제거 | 3 고압 펌프이동상 가압 | 4 오토샘플러시료 주입 | 5 컬럼 (오븐)성분 분리 | 6 검출기신호 감지 | 7 데이터 시스템크로마토그램 |
고압 펌프 (Solvent Delivery Pump)
통상 6,000~15,000 psi의 고압으로 이동상을 일정한 유속(0.5~2.0 mL/min)으로 공급합니다. 왕복형 피스톤 2개를 직렬로 연결해 압력 맥동(Pulsation)을 최소화합니다. 맥동이 클 경우 기저선 노이즈 증가로 정량 정확도가 저하됩니다.
자동 시료 주입기 (Autosampler)
로봇 제어로 나노리터(nL) 단위까지 정밀한 시료 주입이 가능합니다. 야간·주말 연속 분석으로 실험실 생산성을 극대화하며, 수동 주입 대비 인적 오차가 현저히 줄어 재현성이 향상됩니다.
컬럼 오븐 (Column Oven / TCC)
온도 ±0.1°C 이내로 정밀 제어하여 Retention Time 재현성을 보장합니다. 온도 상승 시 이동상 점도가 낮아져 배압이 감소하고 물질 전달 속도가 빨라집니다. 단, 온도 불안정 시 tR 변동이 심해져 정성 오류가 발생합니다.
검출기 (Detector)
컬럼에서 용출되는 성분을 전기 신호로 변환합니다. 모든 화합물에 반응하는 만능 검출기는 없으므로, 분석 대상 물질의 특성(UV 흡수 여부, 형광 여부, 분자량 등)에 따라 선택해야 합니다.
산업별 응용 분야
제약 · 바이오 의약품
- 주성분(API) 함량 및 순도 시험
- 공정 불순물, 분해 산물 프로파일링
- 잔류 용매 분석 (ICH Q3C)
- 안정성 시험 (장기·가속·강제 분해)
- 용출 시험 (생체이용률 예측)
- 바이오 의약품 당쇄 구조 분석
천연물 · 한약재 연구
- 유효 성분 정성·정량 분석
- 지표 성분 규격 설정
- 추출 조건 최적화 모니터링
- 배치 간 균일성(Batch-to-batch) 확인
- 지표 성분 안정성 평가
- 원료 표준화 및 QC 프로파일링
식품 · 건강기능식품
- 비타민, 아미노산, 유기산 정량
- 잔류 농약, 항생제 잔류 검출
- 보존제, 인공 감미료, 식용 색소
- 아플라톡신 등 곰팡이 독소
- 당류 프로파일링
- 기능성 원료 함량 표준화
화장품 · 기능성 소재
- 미백·주름 개선 성분 함량 인증
- 파라벤·보존제 규격 확인
- 자외선 차단제 성분 분석
- 비타민 C 유도체, 나이아신아마이드
환경 분석
- 하천·식수 내 살충제·제초제
- PFAS (과불화화합물) ppt 수준 분석
- 토양·퇴적물 내 다환방향족탄화수소(PAH)
- 내분비계 교란 물질
임상 · 비임상 연구
- 약동학(PK) 혈중 약물 농도 분석
- 대사체 프로파일링 (Metabolomics)
- HbA1c, 호르몬 등 임상 바이오마커
- 신약 후보물질 순도·안정성 확인
응용 예시
FAQ
Q1. 분석하고자 하는 물질의 표준품(Standard)이 없어도 분석이 가능한가요?
Raw 264.7은 macrophage 유래 세포주로, LPS 자극 시 염증 반응을 유도할 수 있어 항염 물질 스크리닝에 널리 사용됩니다.
Q2. 분석 결과의 재현성은 어떻게 보장되나요?
모든 분석은 ICH 가이드라인에 준하는 밸리데이션 파라미터(정밀도·정확도·직선성·검출 한계 등)를 확인하여 데이터 신뢰성을 보장합니다. 동일 조건에서 3회 이상 반복 측정하여 RSD < 2% 이내의 재현성을 확보하며, 이를 보고서에 명시합니다.
Q3. 논문 제출용 데이터로 활용 가능한가요?
가능합니다. 합성 의약품 또는 천연물 소재의 공정 중 불순물, 분해 산물, 잔류 용매 등에 대한 프로파일링 분석을 함께 제공합니다. ICH Q3A/Q3B 가이드라인에 따른 불순물 규격 판정도 지원하므로, 비임상 또는 임상 진입을 위한 QC 데이터 패키지가 필요하신 경우 상담해 주시기 바랍니다.
Q4. 시료는 어떤 형태로, 얼마나 보내야 하나요?
시료는 분말, 액체, 정제 등 다양한 형태로 제출 가능합니다. 일반적으로 정량 분석 기준 최소 10mg 이상을 권장하며, 불순물 프로파일링의 경우 50mg 이상이 필요합니다. 시료 전송 전 반드시 사전 상담을 통해 보관 조건(냉장/냉동/차광)과 포장 방법을 확인하시기 바랍니다.
