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Immunocytochemistry

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세포 수준의 표적 단백질 검출 및 정량화 서비스





Immunocytochemistry
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세포 수준의 표적 단백질 검출 및 정량화 서비스

Radotinib 항섬유화 논문 기반 ICC 분석을 CRO로 제공합니다.

UMUST R&D는 Radotinib가 TGF-β1 유도 EMT 및 섬유화 기전을 억제하는 논문에서 사용된 Immunocytochemistry(ICC) 기법을 기반으로, 항섬유화·항염증·항전이(anti-EMT) 후보물질을 평가하는 전문 ICC CRO 서비스를 제공합니다.


A549 폐 상피세포에서 TGF-β1로 EMT를 유도하고, 후보물질 처리 후 E-cadherin, α-SMA, F-actin 등의 마커 변화를 형광 ICC로 분석함으로써, 후보물질이 실제로 섬유화 및 EMT를 억제하는지를 시각적·정량적으로 입증할 수 있습니다.

논문 기반 ICC 분석 플랫폼

  • TGF-β1 (10 ng/mL, 24 h) 유도 A549 EMT 모델 
  • Radotinib 논문과 동일한 ICC 조건(Fixation, Blocking, Antibody 등) 
  • E-cadherin / α-SMA / F-actin / DAPI 핵 염색 
  • Confocal microscopy(예: Zeiss LSM 시리즈) 기반 고해상도 이미지 
  • ImageJ/Fiji 기반 정량 분석(MFI, positive area 등)

※ 필요 시, 귀사 후보물질에 맞춰 세포주(A549 외 primary cell 등)와 자극 조건(TGF-β1 농도·시간)을 커스터마이징할 수 있습니다.

그림 1. TGF-β1 유도로 EMT가 유도된 세포에서 α-SMA 증가, E-cadherin 감소, F-actin 이 재구성된 패턴을 확인한 ICC 예시
Baek S, Kwon SH, Jeon JY, Lee GY, Ju HS, Yun HJ, Cho DJ, Lee KP, Nam MH. Radotinib attenuates TGFβ -mediated pulmonary fibrosis in vitro and in vivo: exploring the potential of drug repurposing. BMC Pharmacol Toxicol. 2022 Dec 15;23(1):93. doi: 10.1186/s40360-022-00634-x. PMID: 36522756; PMCID: PMC9753032.
그림 1. TGF-β1 유도로 EMT가 유도된 세포에서 α-SMA 증가, E-cadherin 감소, F-actin 이 재구성된 패턴을 확인한 ICC 예시
Baek S, Kwon SH, Jeon JY, Lee GY, Ju HS, Yun HJ, Cho DJ, Lee KP, Nam MH. Radotinib attenuates TGFβ -mediated pulmonary fibrosis in vitro and in vivo: exploring the potential of drug repurposing. BMC Pharmacol Toxicol. 2022 Dec 15;23(1):93. doi: 10.1186/s40360-022-00634-x. PMID: 36522756; PMCID: PMC9753032.

논문 기반 ICC 실험 조건 (서비스 SOP)

1) 세포 및 처리 조건

  • 염색 없이 굴절률(RI) 기반으로 세포 영상 획득
  • 세포 구조, 두께, 내부 밀도 변화를 3D로 관찰
  • 실시간 Live-cell 관찰 가능

2) Fixation & Permeabilization

  • 세포 건조질량(Dry mass) 정량 분석 
  • 세포 부피(Volume), 표면적(Surface area) 측정 
  • 세포 증식/억제, 부종/위축 등 생물물리학적 변화 평가

3) Blocking & Antibody

  • 5% BSA 기반 Blocking (1 h, RT)
  •  Primary: 
    • Anti–E-cadherin (epithelial marker) 
    • Anti–α-SMA (fibrosis marker) 
    • F-actin probe (예: Phalloidin 기반) 
  • Secondary: Alexa Fluor 계열 형광항체 
  • DAPI로 핵 염색 후 Mounting

분석 마커 및 해석 포인트

E-cadherin (상피세포 마커)

  • 상피세포 특이적 cell-cell junction 단백질
  • TGF-β1 처리 → 발현 감소(EMT 진행)
  • 후보물질 처리로 E-cadherin 회복 여부 평가
  • 세포막 localization 유지 여부 인지

α-SMA (섬유화 마커)

  • myofibroblast 활성화의 대표 마커
  • TGF-β1 → α-SMA 발현 증가
  • 후보물질이 α-SMA 발현 상승을 억제하는지 분석
  • 섬유화 억제제/항기질화 물질의 핵심 평가지표

F-actin (세포골격 재구성)

  • EMT에 따라 스트레스 파이버(stress fiber) 증가
  • 세포 형태 변화 및 이동성 증가와 연관
  • 후보물질이 actin 재배열을 정상화하는지 평가

정량 분석 (ImageJ/Fiji 기반)

분석 항목 예시:


  • Mean Fluorescence Intensity (MFI)
  • Positive area (%) 또는 positive cell 비율
  • E-cadherin / α-SMA ratio (EMT index)
  • F-actin stress fiber score (형태학 스코어링)
  • Field 당 cell 수, group 간 통계분석(t-test/ANOVA) 

ICC 기반 항섬유화 기전 분석 CRO 패키지

Package 1
Basic EMT-ICC
구성 내용
  • E-cadherin / α-SMA / F-actin 3종 ICC
  • TGF-β1 EMT 모델 + 단일 농도 후보물질
  • 고해상도 이미지 + 기본 정량(MFI, positive area)
적용 예시
  • 후보물질 EMT 억제 가능성 1차 평가
Package 2
Advanced Fibrosis-ICC
구성 내용
  • Basic EMT-ICC 패키지 포함
  • 추가 섬유화/EMT 마커(예: Vimentin, N-cadherin) 옵션
  • Smad2/3 nuclear translocation ICC 연계 가능
적용 예시
  • 섬유화 기전(EMT → myofibroblast) 심화 분석
Package 3
ICC + WB + qPCR 통합
구성 내용
  • ICC: E-cad, α-SMA, F-actin, 선택 마커
  • Western blot: Smad2/3, ERK, p38, AKT 등 signaling
  • qPCR: Snail, Twist, Collagen, TGF-β1 경로 유전자
  • 논문 수준 Figure & 레포트 제공
적용 예시
  • 논문/특허/과제용 항섬유화 기전 완성 패키지
Package 4
Custom EMT/Fibrosis
구성 내용
  • 고객 맞춤 세포주/자극/타깃 마커 설계
  • 2D/3D culture, co-culture 등 커스터마이징
  • in vitro → in vivo 데이터 연계 자문 가능
적용 예시
  • 특수 모델, 독자적 기전 연구 프로젝트

 UMUST R&D만의 차별성

  • Radotinib 항섬유화 논문 기반 ICC 프로토콜 적용 
  • EMT·섬유화·TGF-β1 경로 전문성 보유
  •  ICC + Western blot + qPCR + 조직병리(H&E, IHC)까지 One-stop 
  • ISO 9001 품질 시스템을 기반으로 SOP 관리
  • 논문 작성 경험을 바탕으로 Figure · Legend · 결과 해석까지 지원

제공 산출물 (Deliverables)

  • 고해상 ICC 이미지(원본 TIFF & 편집본 PNG/JPG)
  • 마커별 MFI, positive area, cell count 등 정량 데이터(Excel)
  • 군 간 통계 분석 결과(p-value 포함)
  • EMT/Fibrosis index 기반 평가 리포트(PDF)
  • 논문 스타일 Figure(복수 패널 구성 및 라벨링 포함, 요청 시)

Radotinib 항섬유화 논문 기반 ICC 분석을 CRO로 제공합니다.

UMUST R&D는 Radotinib가 TGF-β1 유도 EMT 및 섬유화 기전을 억제하는 논문에서 사용된 Immunocytochemistry(ICC) 기법을 기반으로, 항섬유화·항염증·항전이(anti-EMT) 후보물질을 평가하는 전문 ICC CRO 서비스를 제공합니다.


A549 폐 상피세포에서 TGF-β1로 EMT를 유도하고, 후보물질 처리 후 E-cadherin, α-SMA, F-actin 등의 마커 변화를 형광 ICC로 분석함으로써, 후보물질이 실제로 섬유화 및 EMT를 억제하는지를 시각적·정량적으로 입증할 수 있습니다.

논문 기반 ICC 분석 플랫폼

  • TGF-β1 (10 ng/mL, 24 h) 유도 A549 EMT 모델
  • Radotinib 논문과 동일한 ICC 조건(Fixation, Blocking, Antibody 등)
  • E-cadherin / α-SMA / F-actin / DAPI 핵 염색
  • Confocal microscopy(예: Zeiss LSM 시리즈) 기반 고해상도 이미지
  • ImageJ/Fiji 기반 정량 분석(MFI, positive area 등)

※ 필요 시, 귀사 후보물질에 맞춰 세포주(A549 외 primary cell 등)와 자극 조건(TGF-β1 농도·시간)을 커스터마이징할 수 있습니다.

그림 1. TGF-β1 유도로 EMT가 유도된 세포에서 α-SMA 증가, E-cadherin 감소, F-actin 이 재구성된 패턴을 확인한 ICC 예시
Baek S, Kwon SH, Jeon JY, Lee GY, Ju HS, Yun HJ, Cho DJ, Lee KP, Nam MH. Radotinib attenuates TGFβ -mediated pulmonary fibrosis in vitro and in vivo: exploring the potential of drug repurposing. BMC Pharmacol Toxicol. 2022 Dec 15;23(1):93. doi: 10.1186/s40360-022-00634-x. PMID: 36522756; PMCID: PMC9753032.
그림 1. TGF-β1 유도로 EMT가 유도된 세포에서 α-SMA 증가, E-cadherin 감소, F-actin 이 재구성된 패턴을 확인한 ICC 예시
Baek S, Kwon SH, Jeon JY, Lee GY, Ju HS, Yun HJ, Cho DJ, Lee KP, Nam MH. Radotinib attenuates TGFβ -mediated pulmonary fibrosis in vitro and in vivo: exploring the potential of drug repurposing. BMC Pharmacol Toxicol. 2022 Dec 15;23(1):93. doi: 10.1186/s40360-022-00634-x. PMID: 36522756; PMCID: PMC9753032.

논문 기반 ICC 실험 조건 (서비스 SOP)

1) 세포 및 처리 조건
  • 염색 없이 굴절률(RI) 기반으로 세포 영상 획득
  • 세포 구조, 두께, 내부 밀도 변화를 3D로 관찰
  • 실시간 Live-cell 관찰 가능





2) Fixation & Permeabilization
  • 세포 건조질량(Dry mass) 정량 분석
  • 세포 부피(Volume), 표면적(Surface area) 측정
  • 세포 증식/억제, 부종/위축 등 생물물리학적  변화 평가



3) Blocking & Antibody
  • 5% BSA 기반 Blocking (1 h, RT)
  • Primary:
    • Anti–E-cadherin (epithelial marker)
    • Anti–α-SMA (fibrosis marker)
    • F-actin probe (예: Phalloidin 기반)
  • Secondary: Alexa Fluor 계열 형광항체
  • DAPI로 핵 염색 후 Mounting

분석 마커 및 해석 포인트

E-cadherin (상피세포 마커)
  • 상피세포 특이적 cell-cell junction 단백질
  • TGF-β1 처리 → 발현 감소(EMT 진행)
  • 후보물질 처리로 E-cadherin 회복 여부 평가
  • 세포막 localization 유지 여부 인지
α-SMA (섬유화 마커)
  • myofibroblast 활성화의 대표 마커
  • TGF-β1 → α-SMA 발현 증가
  • 후보물질이 α-SMA 발현 상승을 억제하는지 분석
  • 섬유화 억제제/항기질화 물질의 핵심 평가지표
F-actin (세포골격 재구성)
  • EMT에 따라 스트레스 파이버(stress fiber) 증가
  • 세포 형태 변화 및 이동성 증가와 연관
  • 후보물질이 actin 재배열을 정상화하는지 평가

정량 분석 (ImageJ/Fiji 기반)

분석 항목 예시:
  • Mean Fluorescence Intensity (MFI) 
  • Positive area (%) 또는 positive cell 비율 
  • E-cadherin / α-SMA ratio (EMT index) 
  • F-actin stress fiber score (형태학 스코어링)
  • Field 당 cell 수, group 간 통계분석(t-test/ANOVA)


ICC 기반 항섬유화 기전 분석 CRO 패키지

패키지
구성 내용적용  예
Package 1
Basic EMT-ICC
• E-cadherin / α-SMA / F-actin 3종 ICC
• TGF-β1 EMT 모델 + 단일 농도 후보물질
• 고해상도 이미지 + 기본 정량(MFI, positive area)
후보물질 EMT 억제 가능성 1차 평가
Package 2
Advanced Fibrosis-ICC
• Basic EMT-ICC 패키지 포함
• 추가 섬유화/EMT 마커(예: Vimentin, N-cadherin) 옵션
• Smad2/3 nuclear translocation ICC 연계 가능
섬유화 기전(EMT → myofibroblast) 심화 분석
Package 3
ICC + WB + qPCR 통합  		• ICC: E-cad, α-SMA, F-actin, 선택 마커
• Western blot: Smad2/3, ERK, p38, AKT 등 signaling
• qPCR: Snail, Twist, Collagen, TGF-β1 경로 유전자
• 논문 수준 Figure & 레포트 제공
논문/특허/과제용 항섬유화 기전 완성 패키지
Package 4
Custom EMT/Fibrosis
• 고객 맞춤 세포주/자극/타깃 마커 설계
• 2D/3D culture, co-culture 등 커스터마이징
• in vitro → in vivo 데이터 연계 자문 가능
특수 모델, 독자적 기전 연구 프로젝트


UMUST R&D ICC CRO의 차별성

  • Radotinib 항섬유화 논문 기반 ICC 프로토콜 적용
  • EMT·섬유화·TGF-β1 경로 전문성 보유
  • ICC + Western blot + qPCR + 조직병리(H&E, IHC)까지 One-stop
  • ISO 9001 품질 시스템을 기반으로 SOP 관리
  • 논문 작성 경험을 바탕으로 Figure·Legend·결과 해석까지 지원

제공 산출물 (Deliverables)

  • 고해상 ICC 이미지(원본 TIFF & 편집본 PNG/JPG)
  • 마커별 MFI, positive area, cell count 등 정량 데이터(Excel)
  • 군 간 통계 분석 결과(p-value 포함)
  • EMT/Fibrosis index 기반 평가 리포트(PDF)
  • 논문 스타일 Figure(복수 패널 구성 및 라벨링 포함, 요청 시)


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귀사의 후보물질이 TGF-β1 유도 EMT 및 섬유화를 억제하는지 ICC로 명확하게 입증하고 싶으신가요?
세포주, 처리 농도, 타깃 마커, 희망하는 데이터 수준(ICC 단독 vs ICC+WB+qPCR)을 알려주시면,
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