Western blot

실험 개요

Western blot은 세포 혹은 동물 조직 내에서 특정 단백질의 발현을 확인할 수 있는 실험 기법입니다. 이 방법은 단백질을 전기영동을 통해 분리한 후, 특정 단백질을 인식하는 항체(antibody)를 사용하여 원하는 단백질의 존재 여부 및 발현 수준을 검출합니다.

실험 방법

1. 단백질 추출: 세포나 조직에서 단백질을 추출합니다 (lysis buffer 사용)
2. 단백질 정량: 추출한 단백질의 농도를 측정하여 균등하게 로딩합니다 (예: BCA assay).
3. SDS-PAGE 전기영동: 단백질을 크기별로 분리합니다.
4. Transfer: 분리된 단백질을 PVDF 또는 nitrocellulose 멤브레인으로 옮깁니다.
5. Blocking: 멤브레인의 비특이적 결합을 방지하기 위해 blocking 합니다 (예: 5% BSA 또는 skim milk).
6. 1차 항체 반응: 타깃 단백질에 특이적인 1차 항체를 멤브레인에 처리합니다.
7. 2차 항체 반응: 1차 항체를 인식하는 효소 결합된 2차 항체를 처리합니다.
8. 검출: ECL(chemiluminescence) 등의 방법으로 단백질 밴드를 시각화합니다. 

적용 분야

실험 결과 예시